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ELISA試劑盒的靈敏度可通過(guò)以下方法進(jìn)行提升
點(diǎn)擊次數(shù):730 更新時(shí)間:2019-07-11
   Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中,ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。
 
  如何提升ELISA試劑盒的靈敏度:
 
  1、包被液稀釋的抗原(4、8、16、32、64、128ng/ml),用移液器小心將抗原液100μl加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可產(chǎn)生氣泡。每個(gè)濃度加4孔(4個(gè)復(fù)孔),對(duì)照孔4孔加入相同體積的包被液;其中兩孔加入100μl樣本。用保鮮膜包好酶標(biāo)板,將酶標(biāo)板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中,放入4℃中包被過(guò)夜。
 
  2、洗滌:將酶標(biāo)板孔中的包被液傾干凈,并反扣在干凈的吸水紙上拍干,加入洗滌液洗滌進(jìn)行洗滌。采用浸泡式洗滌法,將洗滌液注滿板孔,放置3min,間歇搖動(dòng),浸泡時(shí)間不隨意縮短,吸干孔內(nèi)洗滌液,也可甩去洗滌液,反扣在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌4次。
 
  3、封閉:在酶標(biāo)板孔的底部加入封閉液200μl,室溫下封閉1h。
 
  4、1h后將酶標(biāo)板孔中的封閉液傾倒干凈,并反扣在干凈的吸水紙上拍干,然后每孔中加入一抗使用液100μl,注意將抗體液加在酶標(biāo)板孔的底部,避免加在孔壁上部。用保鮮膜包好酶標(biāo)板,將酶標(biāo)板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中,并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯,在37℃溫箱中放置2h。
 
  5、2h后取出酶標(biāo)板,傾倒干凈酶標(biāo)板孔中的一抗溶液,并反扣在干凈的吸水紙上拍干。洗滌4次,洗滌方法同2。
 
  6、在酶標(biāo)板孔中加入梅標(biāo)二抗1:4000倍稀釋的溶液100μl,加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可產(chǎn)生氣泡。用保鮮膜包好酶標(biāo)板,將其放入底部墊有濕砂布的鋁盒中,并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯,在37℃溫箱中放置1h。
 
  7、取出酶標(biāo)板,傾倒干凈孔中的二抗溶液,并反扣在干凈的吸水紙上拍干,按2洗滌方法洗滌4次。
 
  8、在酶標(biāo)板每孔中加入底物A液50μl,底物B液50μl,反應(yīng)15min~20min后,在每孔中加入反應(yīng)中止液50μl,在中止反應(yīng)后15min時(shí)在酶標(biāo)儀上于450nm處測(cè)定OD值。
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